样品匀浆后,加入氯仿前,可在-80°C 冻存放置一个月。
RNA 沉淀可以保存在 75%乙醇中,2-8°C 放置一周或-20°C 放置一年。
该试剂盒***于专业人员的科学研究使用,不得用于临床诊断或***,更不得用于食品或药品中。
实验步骤、细胞裂解或组织匀浆:
a贴壁细胞:吸尽培液,按照比例加入 Trizol 消化细胞,江苏快速RNA提取试剂盒50T/690元,即每 10 平方厘米细胞中加入 1 ml Trizol,六孔板每孔加 1 ml Trizol,12 孔板每孔加 0.5 ml Trizol。晃动 3-5 下,江苏快速RNA提取试剂盒50T/690元,江苏快速RNA提取试剂盒50T/690元,再用移液器反复吹打几下,确保细胞全部裂解,然后将溶液转移至离心管中。【注】加入 Trizol 量不足时,会导致 DNA 污染。
. 样品处理a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟, 10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
意:此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。
将纯化柱转入一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。
洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。
注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。
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