实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点,此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域 。在分子生物学领域的研究应用 定量核酸浓度:传统方法是用琼脂糖凝胶电泳或者分光光度计测定核酸浓度,其结果不准确而且易污染,实时荧光定量PCR可以解决这些问题,它的准确性、灵敏度高且无污染,对一些传染性疾病进行定量分析、病原微生物和***含量检测,江苏MiRNA 荧光定量PCR检测服务,此项技术都是优先
研究基因表达:应用实时定量PCR技术可以对基因时间、空间表达水平差异进行比较,江苏MiRNA 荧光定量PCR检测服务。例如,江苏MiRNA 荧光定量PCR检测服务,对特定基因用物理、化学、***等不同方法处理后的差异进行比较,为人们的科学研究提供依据 江苏MiRNA 荧光定量PCR检测服务
一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段、荧光信号**扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化;在平台期,扩增产物已不再呈**级增加,PCR终产物量与起始模板量之间没有线性关系,无法计算起始模板拷贝数。因此只有在荧光信号**扩增阶段,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,故选择在这个阶段进行定量分析。为了定量方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了几个重要的概念:扩增曲线、荧光阈值、CT值。北京非编码RNA 荧光定量PCR检测服务
每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标**起始拷贝数的对数,纵坐标**Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。同时,对于荧光PCR实验来说,CT值也是判读样品阴阳性的重要指标。
大量的荧光定量PCR研究资料表明,病原体数量与***性疾病病情的轻重程度、传染性及***效果均有相关性。因此,通过荧光定量PCR方法得到的检测结果,一定程度上可以准确反映疾病***的情况。
在分子生物学领域的研究应用
用于单核苷酸多态性(SNP)检测分析:人们对疾病的易感性和对同一种******同一种疾病的效果是有差异性的,遗传物质DNA的多态性RELP,STR,ABO血型和SNP是个体差异的遗传基础。SNP在人类基因组中***存在,是人类可遗传变异中最常见的一种,在遗传性疾病的研究中具有重要意义
DNA甲基化检测:DNA甲基化是表观遗传学重要的标记信息,通过实时荧光定量PCR技术获得基因组甲基化水平数据对表观遗传学的时空特异性研究具有重要意义
实时荧光定量PCR技术原理将荧光基团加入到PCR反应体系中,通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现,再根据标准曲线定量分析未知模板的方法,即是荧光定量PCR技术。在实时荧光定量PCR中,实时检测全程PCR扩增过程,按照反应时间和荧光信号的变化能够将一条曲线绘制成。混合模板DNA和有荧光素的Taqman探针,遵守聚合酶链反应规律使高温变性,低温复性,适温延伸的热循环完成,切断和模板DNA互补配对的Taqman探针,荧光素在反应体系中游离。荧光在特定光激发下发出,被扩增的目的基因片段随着循环次数的增加呈级增长,Ct值根据实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度求取出来,同时对照多个已知模板浓度的标准品,就能够使待测标本目的基因的拷贝数得出。江苏荧光定量PCR技术服务
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实时荧光定量PCR的应用
目前,qPCR技术已经广泛应用于生物医药食品等行业,应用于疾病的早期诊断、遗传病的早期诊断、***研究、**的诊断与研究、食品病原微生物的检测、转基因食品检测、动物疫病检测等,除此之外,还包括:
● 基因扩增
● 扩增特异性分析
● 基因定量分析
● 基因检测
● 基因分型
● SNP分析
● RFLP多态性分析
● 单/多基因表达研究
● 高通量基因表达谱研究
实时荧光定量PCR技术,顾名思义,就是在PCR的基础上加入荧光基团,通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程,***通过对未知模板进行定量分析的方法。 江苏MiRNA 荧光定量PCR检测服务
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